Serişteyên bingehîn ji bo Cryopreservation of Cultures Cultures

Serişteyên bingehîn ji bo Cryopreservation of Cultures Cultures

Hucreyan di çalakiyên mezinbûna normal de metabolîzma xwe didomînin, ku hewce dike ku beşdariya proteasesên cûda hewce dike. Dema ku germahî li jêr -70 ° C dimîne, proteases xebitîn. Ji ber vê yekê, li hawîrdorek bi germên zehf nizm, hucre dikarin çalakiyên xwe yên metabolîk rawestînin û têkevin rewşek dormal a ku destûrê dide hilanîna dirêj-dirêj.

1. Materyalên ezmûnî

Materyona Base:

Navîn Cultureanda bingehîn

Serum (FBes Conventional / NBS)

Karê Ultrapure Workbench

Dimethyl Sterile (DMSO)

PBS PBS Sterlate Solution Sale Salter

Gunê Pipetting

Gunek Pipetting Electric

Amadekirina ezmûnan

a) Amadekirina çareseriya serbestberdanê:

Hucreyên Giştî: 55% serma navîn + 40% bovine serum (fbs / nbs) + 5% dmso

Hucreyên Vital: 90% Seruma Bovine (FBS / NBS) + 10% DMSO

Aliquot çareseriya cryopresorive ya amade li Tûreyek 15 ML Centrifugate [nêçîr] û li 4 ° C ji bo karanîna paşîn hilîne.

(b) Amadekirina hucreyan ji bo birêkûpêk:

Berî rizgarkirina hucreyan, hucreyên bi statûya mezinbûna baş û di qonaxa mezinbûna logarithmic de hilbijêrin û wan bi 12-24 demjimêrên nû yên nû berî ku hûn şertê hucreyê bigirin, li şûna wan bidin.

2. prosedurek ezmûnî

1. Dendika hucreyan bişopînin ku bêne qewirandin, ku% 80% 90% e. Gunek pipette bikar bînin da ku hûn navgîniya kevn bikar bînin, PB-ya PB-ê zêde bikin da ku hucreyan 1-2 carî bişon, û di hawîrdora çandî de navîn hilînin.

2. Mîqdarek maqûl a trypsin an ava vexwarinê zêde bikin da ku destûrê bidin ku trypsin têkevin hucreyan, û wan li incubator ji bo kêfê bicîh bikin. Rewşa hucreyên di bin mîkroskopê de binihêrin: Cytoplasm vekişandin û hucre êdî nayên girêdan. Di vê nuqteyê de, çareseriya rawestanê zêde bikin da ku pêvajoya jînkirinê rawestînin.

3. Bi nermî hucreyan bi tîpek biqelînin da ku rawestandina hucreyê û centrifuge hucreya rawestandina hucreyê li 1000 rpm ji bo 3-5 hûrdeman.

Supernatant hilweşînin, li ser çareseriya serbestberdana çareseriyê, û bi nermî pipette zêde bikin da ku hucreyan bi yekalî bijî. Dendika hucreyê bi navgîniya cryopreservation re bicîh bikin da ku dendika dawîn 5 × 106 / ml ~ 1 × 107 / ml bikin.

4. Gunek pipette bikar bînin da ku li gorî kapasîteya bendewar tubên cryogenic veqetînin, û makîneyek kapîtal a otomatîk ji bo cap û sekinandinê bikar bînin.

5. Bernameya Cryopreseriya standard rêjeyek germbûnê ya -1 ° C to -2 ° C / min e, û hucreyên ku bêne qewirandin li gorî gavên jêrîn, germahiya odeyê → 4 ° C (20min) - 20 ° C (30min) ° --80 ° C ° C (şevek) → hilanîna dirêj-dirêj di nîtrojenê derewîn de.

Her weha dikare di şevê de rasterast li ser freezer li -80 ° C were hilanîn û dûv re jî ji bo hilanîna nîtrojenê derewîn veguhestin.

Yongyue Tenduristî pargîdaniyek teknolojî ya teknîkî ye ku di R & D de, hilber û firotanên biyomedîkî de pispor e. Pêşniyarên Pipette, Pipettes, PRC Plateya PCR, hilberên çandên hucreyê û xwerûya kedkarên din ên biyolojîkî. Tenduristiya Yongyue hêja û bijareya we ye! Hûn bi xêr hatin!